制備工藝與表征技術(shù)體系

1 制備流程與質(zhì)量控制

RM8671 人IgG 1κ單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)品的制備遵循與商業(yè)化生物制藥產(chǎn)品同等嚴(yán)格的質(zhì)量體系，確保其批間一致性與長期穩(wěn)定性。制備過程以重組DNA技術(shù)為基礎(chǔ)，在鼠懸浮培養(yǎng)物中實(shí)現(xiàn)抗體的高效表達(dá)，隨后通過多輪純化工藝去除雜質(zhì)，最終獲得高純度的抗體原液。在分裝環(huán)節(jié)采用分層抽樣策略，確保每支冷凍管內(nèi)樣品的均一性。

為建立完整的質(zhì)量追溯體系，RM8671的生產(chǎn)過程與NIST內(nèi)部基準(zhǔn)樣品8670（PS 8670）建立關(guān)聯(lián)，通過同步分析實(shí)現(xiàn)歷史數(shù)據(jù)的連續(xù)性銜接，為后續(xù)的生命周期管理奠定基礎(chǔ)。

2 表征技術(shù)平臺

NIST對RM8671開展了迄今為止全面的表征分析，形成了涵蓋身份鑒別、純度分析、穩(wěn)定性評估等多維度的技術(shù)體系，相關(guān)成果已匯編為三卷本研究著作，成為抗體表征技術(shù)的重要參考資料。RM8671 人IgG 1κ單克隆抗體標(biāo)準(zhǔn)品核心表征技術(shù)及指標(biāo)如下：

身份鑒別：采用肽圖分析技術(shù)作為核心鑒別方法，通過胰蛋白酶/LysC酶解結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）分析，實(shí)現(xiàn)抗體一級結(jié)構(gòu)的精準(zhǔn)確認(rèn)。典型前處理流程包括變性、還原、烷基化、酶解及脫鹽等步驟，其中酶解采用1:40的酶蛋白比例，分兩步溫育（37℃分別孵育2小時和14小時）以確保酶解完l全；

純度分析：建立了多維純度評估體系，采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）評估電荷異質(zhì)性，毛細(xì)管十二烷基硫酸鈉電泳（CE-SDS）和尺寸排阻色譜（SEC）測定單體純度，確保對抗體聚合體、片段等雜質(zhì)的有效檢出；

物理化學(xué)特性：通過紫外-可見分光光度法（UV/Vis）進(jìn)行濃度標(biāo)定，動態(tài)光散射（DLS）分析分子 hydrodynamic 半徑，流式成像技術(shù)評估顆粒度分布，全面表征抗體的基本物理化學(xué)屬性；

翻譯后修飾分析：針對糖基化、蛋氨酸氧化等關(guān)鍵修飾，采用高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行定性定量分析，明確了各修飾位點(diǎn)的豐度分布特征。

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